译自Chem-Station网站日本版 原文链接:タンパク質の定量法―ビシンコニン酸法 Protein Quantification – Bicinconic Acid Assay
翻译:炸鸡
原理
Bicinconic酸(BCA)法(Bicinconic Acid Assay)是在Lowry法的基础上进行改良的比色法,用来测定蛋白质的浓度。
相较于Lowry法用的Folin-Ciocalteu试剂,Bicinconic酸法添加了Bicinconic酸(BCA)。Cu2+经蛋白质还原生成的Cu+与BCA形成的红紫色的配合物。测量配合物在562nm处的吸光度,然后用校准曲线定量。
优点
- 测定范围在001-2 mg/mL,灵敏度很好
- 大范围内呈线性变化
- 操作简单
- 相较于Lowry法,更不容易受到表面活性剂的影响
缺点
- 会受到螯合剂和硫醇还原剂的影响
步骤
BCA检测试剂盒可从不同的公司买到,但试剂可以用以下配方制备。
BCA试剂调制法
A液
将2,2’-联喹啉-4,4’-二甲酸二钠(10 g)、Na2CO3(20 g)、酒石酸钠(1.6 g)、NaOH(4 g)、NaHCO3(9.5 g)溶解于超纯水中,定容至1L。然后用10N NaOH水溶液将pH值调节至11.25左右。A液可在室温下保存数月。
B液
将Cu2SO4-5H2O(4 g)溶解于超纯水中,定容至100mL。B液可在室温下保存数月。
步骤
- 将A液和B液按体积比50꞉1的比例混合均匀(即用即配)
- 向每100μL的样品加入1ml1中的混合溶液,高速搅拌
- 37℃下静置30分钟
- 测定在562nm下的吸光度
- 以BSA为标准样品制备稀释组和校准曲线,据此计算浓度。
参考文献
- ”総タンパク質の定量法” 鈴木祥夫、ぶんせき2018, 1, 2.[PDF]
- “[6] Quantification of protein” Stoscheck, C. M. Enzymol.1990, 182, 50. doi:10.1016/0076-6879(90)82008-P
- “Measurement of protein using bicinchoninic acid” Smith, P. K. et al. Biochem.1985, 150, 76. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
本文版权属于 Chem-Station化学空间, 欢迎点击按钮分享,未经许可,谢绝转载
No comments yet.